綠色熒光蛋白在分子和細胞生物學中的應用越來越多。由于應用的多樣性,已經開發出形成原始野生型綠色熒光蛋白(wtGFP)的幾種變體。這些變體中的幾個具有與wtGFP不同的激發和發射光譜。為了在定量這些GFP時獲得zui大的靈敏度,重要的是使用zui合適的激光光源。在這里,我們表征了一些常用的GFP變體的激發和發射光譜,并建議使用LUYOR-3410和LUYOR-3415便攜式熒光蛋白激發光源觀察。
wtGFP蛋白zui常用的突變可分為三類:
(1)紅移變體;
(2)像變體一樣的野生型;
(3)發出藍色光的變體。如圖1所示,以EGFP為代表的紅移變體具有一個集中在約488 nm處的單個激發峰,發射峰波長為509 nm。類似野生型的變體的主要激發峰位于395 nm,發射峰位于509 nm,而發出藍色的突變體通常在380 nm附近有一個激發峰,在460 nm附近有一個發射峰(圖1)。
表1. GFP變體的激發波長和發射波長數據
GFP的變體 | 激發波長EX (nm) | 發射波長EM (nm) | LUYOR-3415對應波段 |
wtGFP | 395 | 509 | UV |
GFPuV | 395 | 509 | UV |
Stemmer | 395 | 509 | UV |
EGFP | 488 | 509 | RB |
GFP-S65T | 489 | 509 | RB |
Y66H | 382 | 459 | UV |
EBFP | 380 | 460 | UV |
LUYOR-3415RG熒光蛋白激發光源照射植物根系,GFP在植物根系的表達
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