GFP熒光蛋白激發(fā)光源應(yīng)用案例
熒光蛋白激發(fā)光源應(yīng)用于植物和動物研究實(shí)驗(yàn)室，為廣大動植物研究的科研工作者帶來了諸多的便利，以下為熒光蛋白激發(fā)光源常見應(yīng)用：
1、有時候，研究者們需要對小鼠的伏隔核進(jìn)行穿孔，以便進(jìn)一步生化分析。如果能觀測到共轉(zhuǎn)染的熒光，就能很容易找到正確的穿孔部位。研究者們就可以用LUYOR-3260RB單熒光蛋白觀測手電筒來觀測熒光，從而找到正確穿孔位置的。研究者從小鼠大腦中提取GFP標(biāo)記的背紋體。他們把這比喻成：從一個大一點(diǎn)的燕麥片中分離出一塊小的燕麥片，這是很困難的。但是他們用的單熒光蛋白觀測手電筒LUYOR-3430RB，就很容易看到大腦中的目標(biāo)區(qū)域，從而讓解剖更準(zhǔn)確。
2、用LUYOR-3430RB單熒光蛋白觀測手電筒，可以很快的檢測樣本是否染色（Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記）成功。
3、用于結(jié)核分枝桿菌重組株的篩選，在結(jié)核分枝桿菌中成功構(gòu)建了高效同源重組系統(tǒng),利用該系統(tǒng)構(gòu)建了rv1364c、pstP跨膜區(qū)、pstP胞外區(qū)三個突變株,得到雙交換突變株的效率為25％ -62.5％,從雙交換突變株得到無痕缺失突變株的效率為100％.通過gfp作為熒光標(biāo)記基因,利用LUYOR-3430RB GFP激發(fā)光源和LUV-30A熒光觀測眼鏡,可以對平板上的基因缺失株直接進(jìn)行快速判定。
熒光蛋白激發(fā)光源激發(fā)出綠色熒光時，用LUV-30A黃色濾光鏡觀測，可檢測含綠色熒光蛋白（GFP）的生物；激發(fā)光源激發(fā)紅色熒光時，用LUV-50A紅色濾光鏡觀測，可檢測含紅色熒光蛋白（DsRed）的生物。更多熒光蛋白激發(fā)光源用于檢測、篩選轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白（GFP）和紅色熒光蛋白（DsRed）基因的植物、動物及微生物，如水稻、玉米、斑馬魚、小鼠、細(xì)：菌、真菌等等，請咨詢上海峰志儀器有限公司。
RFP熒光蛋白在老鼠上的表達(dá)
上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)美國nightsea、美國路陽生產(chǎn)的熒光蛋白激發(fā)光源、GFP激發(fā)光源、熒光蛋白激發(fā)觀測燈、熒光蛋白體視顯微鏡熒光適配器、熒光蛋白觀測眼鏡，請根據(jù)網(wǎng)頁底部聯(lián)系方式聯(lián)系網(wǎng)頁底部.
GFP激發(fā)光源在細(xì)胞生物學(xué)的應(yīng)用
GFP激發(fā)光源在細(xì)胞生物學(xué)的應(yīng)用具有易于檢測、熒光穩(wěn)定、廣譜性、易于載體構(gòu)建、無毒害諸多優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樵谏飳W(xué)應(yīng)用廣泛，上海峰志儀器有限公司銷售的GFP激發(fā)光源為你簡單整理10個應(yīng)用：
1、對細(xì)胞生理過程監(jiān)控
通過基因操作，蛋白與不同GFP進(jìn)行融合，形成融合蛋白。通過融合蛋白在激發(fā)光源的照射下發(fā)出熒光特制，可以對相應(yīng)蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)運(yùn)以及生理反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)控。監(jiān)控主要有：轉(zhuǎn)移和定位、GFP光譜的生化修飾、熒光共振的能量轉(zhuǎn)移。
2、細(xì)胞篩選
基于GFP能夠吸收并在激發(fā)光源照射下發(fā)出熒光，并且熒光穩(wěn)定以及檢測方法快速、方便的特性，GFP在細(xì)胞篩選上廣泛應(yīng)用。如：應(yīng)用流失細(xì)胞計(jì)數(shù)儀來篩選蛋白產(chǎn)量增強(qiáng)的細(xì)胞；使用GFP作為標(biāo)記快速篩選出在生長抑制環(huán)境下仍能保持重組蛋白大量表達(dá)的CHO細(xì)胞；通過GFP熒光的減少，可以檢測出鼠和人細(xì)胞的凋亡；利用GFP融合細(xì)胞作為細(xì)胞表面活體熒光標(biāo)記，通過篩選已經(jīng)獲得GFP表達(dá)的E.coli、人體腎細(xì)胞和猿猴COS-1細(xì)胞燈特殊類型。
3、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)及蛋白質(zhì)分子的定位
相對于以前使用細(xì)胞分級分離和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)研究蛋白質(zhì)移位，現(xiàn)在使用GFP融合蛋白顯像技術(shù)更簡便且可靠，既能更快又能更全面的對蛋白質(zhì)的移動進(jìn)行研究。如：對幾個GFP突變體的檢定，通過激發(fā)光源激發(fā)不同熒光，從而在活細(xì)胞中準(zhǔn)備的區(qū)分多種不同熒光融合蛋白并了解他們的分布情況。
4、用于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的動力學(xué)研究
研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)主要有：光漂白熒光恢復(fù)法（FRAP）、光漂白熒光損失法(FLIP)。FRAP主要是通過對細(xì)胞內(nèi)特定的點(diǎn)或區(qū)域進(jìn)行強(qiáng)烈的光照，使熒光發(fā)生光跑白作用，再通過相同時間間隔的光影像采樣記錄下熒光恢復(fù)的動力學(xué)過程。FLIP是對細(xì)胞的一個區(qū)域進(jìn)行持續(xù)性的光漂白，再對光漂白區(qū)外的熒光的損失進(jìn)行監(jiān)控就可獲得一些標(biāo)記蛋白之間的相關(guān)性信息。另外一種可以用來研究細(xì)胞內(nèi)返傭動力學(xué)的方法就是熒光相關(guān)性分光光鏡檢查。
5、計(jì)算細(xì)胞生長速度
在高水平組合型表達(dá)GFP的細(xì)胞品系中，在細(xì)胞生長的對數(shù)期。綠色熒光蛋白激發(fā)后所發(fā)出的熒光信號與細(xì)胞的數(shù)量密切相關(guān)。測量到的任何熒光強(qiáng)度都可以相應(yīng)地轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞濃度。盡管在細(xì)胞生長的后期，用熒光信號計(jì)算得到的細(xì)胞數(shù)目略低于培養(yǎng)物種的實(shí)際數(shù)目。但在常用的臺盼藍(lán)技術(shù)方法中，這些誤差是允許的。利用這一技術(shù)，可以測定某些細(xì)胞的分布和生長狀況，尤其是一些透明的動植物組織內(nèi)特定細(xì)胞、化合物的生長、分布情況。也有人用此項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行病毒在植物體內(nèi)的生長、擴(kuò)散情況的研究，取得了不錯的效果。
6、觀察細(xì)胞內(nèi)酶的活動
GFP不僅可以用來探測融合蛋白的空間定位，而且可以對活細(xì)胞的酶活動，如：磷酸化作用、蛋白水解作用燈進(jìn)行報告，還可測量與酶活動相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)的pH、cAMP、Ca2+濃度。通過將外源系列插曲GFP基因中，可以對細(xì)胞內(nèi)酶的活動進(jìn)行觀察以及了解這些酶的生理學(xué)參數(shù)。插入外源基因后所表達(dá)的融合蛋白中的GFP蛋白發(fā)色基團(tuán)會發(fā)生構(gòu)像改變，其發(fā)射的熒光的強(qiáng)度發(fā)生很大的變化。這些指示劑可以用來檢測細(xì)胞內(nèi)許多酶的作用。例如：蛋白水解酶、激酶、氧化還原酶以及一些小配基的濃度。
7、用于細(xì)胞示蹤實(shí)驗(yàn)研究
利用GFP的激發(fā)后發(fā)出熒光可以清楚地對腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移進(jìn)行追蹤。體內(nèi)腫瘤侵襲的研究要求在周圍正常細(xì)胞背景下，能識別少量甚至是單個的瘤細(xì)胞。
8、基因表達(dá)調(diào)控
GFP作為一種活體報告蛋白，用于研究基因表達(dá)的調(diào)控，易于會提觀測和檢測。
9、定量分析
GFP的熒光強(qiáng)度很高，很容易用一起定量檢測，而且研究表明GFP的熒光強(qiáng)度與其相連的細(xì)胞或蛋白有一定的相關(guān)性，只需要作出一條相關(guān)性曲線，就可以對研究隊(duì)形進(jìn)行定量的分析。
10、DFP報告蛋白用于細(xì)胞活體分離與純化
利用細(xì)胞表面標(biāo)記，通過流體細(xì)胞分光光度計(jì)或熒光活化細(xì)胞篩選儀可以分離與純化特殊類型細(xì)胞，對分析cDNA文庫、研究基因的細(xì)胞發(fā)育或組織專一性表達(dá)十分重要。利用GFP融合蛋白為細(xì)胞表面活體熒光標(biāo)記，通過篩選已經(jīng)獲得GFP的表達(dá)的大腸桿菌、人體腎細(xì)胞和猿猴COS-1細(xì)胞特殊類型。
上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)各種熒光蛋白激發(fā)光源（GFP、eGFP、BFP、CFP、YFP、RFP、Dsred、Mcherry），能夠觀測綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、紅色熒光蛋白等在種子、愈傷組織、葉片等上的表達(dá)，便攜式GFP激發(fā)光源能夠在實(shí)驗(yàn)室、溫室大棚、試驗(yàn)田等地方直接觀測熒光蛋白的表達(dá)，請根據(jù)網(wǎng)頁底部聯(lián)系方式聯(lián)系：138-1868-3556，聯(lián)系人：張小姐。
熒光蛋白GFP的應(yīng)用
熒光蛋白GFP在激發(fā)光源的照射下，人眼能明顯的看到熒光，而一起被廣泛應(yīng)用于各種生物研究，主要特性如下
1、易于檢測
GFP熒光反應(yīng)不需外加任何反應(yīng)底物，酶或其他共反應(yīng)銀子，也就不存在這些物質(zhì)可能難于進(jìn)入細(xì)胞的問題，只需紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)，即可發(fā)出綠色熒光，GFP發(fā)射的熒光用LUV-30A熒光觀測眼鏡或用熒光顯微鏡就可以檢測到。靈敏度高，對于單細(xì)胞水平的表達(dá)也可識別，同時還可利用其進(jìn)行定量檢測。由于GFP對活細(xì)胞基本無毒害，因此無需特殊處理就可以很方便進(jìn)行活體觀察。而且，具有不同光譜特性的GFP突變體的獲得，使在同一細(xì)胞中同時分析兩種不同蛋白或啟動子成為可能，可以用于法語細(xì)胞學(xué)、藥物篩選、分析診斷燈研究。這就使GFP有可能成為一種快速、簡便、經(jīng)濟(jì)的標(biāo)記蛋白，GFP基因作為報道基因有很廣泛的應(yīng)用。
2、熒光穩(wěn)定
GFP無光漂白現(xiàn)象，在很大PH范圍內(nèi)（PH7-12）都可以正常發(fā)出熒光，手溫度的影響也很小，只有在超過65℃時才會變性，即熒光消失。熒光顯微鏡強(qiáng)光照射下，GFP抗光漂白能力比熒光素強(qiáng)，特別是在450~490nm藍(lán)光波長下更穩(wěn)定，單在340-390nm或395-440nm范圍內(nèi)，仍會發(fā)生光漂白現(xiàn)象。對于長時間光照，GFP也有很好的耐受性，根據(jù)Sheen等的研究，GFP在受體內(nèi)表達(dá)時可以持續(xù)得到不低于10min的熒光。
3、廣譜性
首先表現(xiàn)在它的表達(dá)幾乎不受種屬范圍的限制，在微生物、植物、動物中都獲得了成功的表達(dá)；其次就是沒有細(xì)胞種類和位置的限制，在各個部位都可以表達(dá)，在紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)下發(fā)出肉眼可見的熒光。
4、易于載體構(gòu)建
由于GFP較小，只含有238個氨基酸，編碼GFP的基因序列也比較短，約2.6KB,所以他可以很方便的同其他序列一起構(gòu)建多種質(zhì)粒，而不至于使質(zhì)粒過大影響轉(zhuǎn)化頻率。盡管野生型的GFP在某些植物和動物中表達(dá)很弱，但是可以通過更換GFP生色團(tuán)氨基酸改變堿基組分、出去內(nèi)含子、更換強(qiáng)啟動子燈方法加強(qiáng)表達(dá)。Connack等篩選出三種含Ser65突變的突變體，在大腸桿菌中表達(dá)時，紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)下的熒光強(qiáng)度比野生型高約100倍。
5、無毒害
Chalfie等的研究表明：GFP對生活細(xì)胞基本無毒害，Sheen等的研究進(jìn)一步表明：在玉米中，即便GFP在細(xì)胞中的表達(dá)量很高時，對細(xì)胞也不會產(chǎn)生明顯毒害，但是至今我們還不了解它對植物再生能力的影響。
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