紫外交聯(lián)儀UCL-3500在RecA突變篩選中的應(yīng)用

RecA突變體篩選：即讓缺失recA基因的菌株在紫外交聯(lián)儀（jiaolianyi）下面照射，沒(méi)有缺失的會(huì)通過(guò)自己修復(fù)而存活，缺失的則死亡。

RecA是大腸桿菌中recA基因座的產(chǎn)物，具有雙重功能，能激活蛋白酶并能改變單鏈DNA分子。蛋白酶-激活活性控制SOS 反應(yīng)；核酸酶活性涉及重組修復(fù)途徑。

RecA recA基因產(chǎn)物具有三種生物化學(xué)活性：重組活性，單鏈DNA結(jié)合活性和ATP酶活性。

RecA蛋白是一種形如纖維,每次通過(guò)初形成單體進(jìn)行伸長(zhǎng)和收縮活動(dòng)的蛋白,在修復(fù)受損DNA的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

是recA基因的產(chǎn)物，分子量約38 000D，為含4個(gè)亞基的四聚體。即使DNA分子有斷裂或“空隙”，兩個(gè)DNA分子也不一定重組。必須有推動(dòng)重組反應(yīng)的酶存在，重組才能進(jìn)行。在這些酶中主要的是RecA蛋白，它能促使兩個(gè)同源DNA分子的堿基配對(duì)，形成雜種分子。

反之，兩條完整的同源雙鏈螺旋DNA，即使和RecA蛋白一起混合，也不會(huì)發(fā)生重組反應(yīng)。RecA蛋白能特異地識(shí)別單鏈DNA，并能將之與同源雙螺旋中的互補(bǔ)順序“退火”，同時(shí)將另一條鏈排擠出去，形成所謂D環(huán)（D－LOOP）。

RecA蛋白是一種多功能蛋白質(zhì)，它參與大腸桿菌的同源重組途徑，有單體和多聚體兩種形式。多聚體由單體在單鏈DNA上從5′→3′方向組裝而成。

RecA的主要功能包括：

1.促進(jìn)2個(gè)DNA分子之間鏈的交換；

2.作為共蛋白酶促進(jìn)LexA 阻遏蛋白的自我水解

RecA蛋白在同源重組的具體作用分為3個(gè)階段：

1.RecA的個(gè)DNA結(jié)合位點(diǎn)（初級(jí)位點(diǎn)）與單鏈DNA結(jié)合，包被DNA，形成蛋白質(zhì)-DNA絲狀復(fù)合物；

2.RecA的第二個(gè)DNA結(jié)合位點(diǎn)（次級(jí)位點(diǎn)）與1個(gè)雙鏈DNA分子結(jié)合，形成三鏈DNA中間體，隨后單鏈DNA侵入雙鏈DNA，尋找同源序列；

3.RecA催化鏈交換，由被RecA包被的單鏈DNA從5′→3′方向取代雙鏈DNA分子之中的同源舊鏈，形成異源雙鏈，并發(fā)生分叉遷移。

為什么UCL-3500紫外交聯(lián)儀深受科研工作者的喜愛(ài)？

1. UCL-3500內(nèi)置有高精度紫外線傳感器，能夠準(zhǔn)確計(jì)量紫外輻照能量。

2. 安裝六根15w 紫外線燈管，輻照強(qiáng)度高，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

3. 大面積輻照室，能夠同時(shí)進(jìn)行多組實(shí)驗(yàn)。

4. 鋁合金輻照腔，散熱快，輻照腔溫度變化小，滿足照射細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需求。

5. 保修時(shí)間長(zhǎng)，國(guó)內(nèi)有維修站，維修便捷。